Abstrakti
metsäpalojen aiheuttama savu voi säilyä ympäristössä viikkokausia, ja vaikka savualtistuksen vaikutuksia siementen itämiseen on tutkittu paljon, savun vaikutuksia lehtien toimintaan ei ole tutkittu juuri lainkaan. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli verrata lehtipuiden angiospermien ja ikivihreiden havupuulajien kasvua ja primaarista ja sekundaarista metabolista vastetta lyhyeen savualtistukseen. Kahdenkymmenen minuutin savualtistus johti yli 50%: n vähenemiseen fotosynteettisessä kapasiteetissa viidessä kuudesta tutkimastamme lajista. Fotosynteesin heikentyminen vastauksena savulle oli ilmanlaadun konduktanssin ja biokemiallisten rajoitusten vähenemisen funktio. Yleensä lehtimäiset koppisiemeniset lajit osoittivat suurempaa herkkyyttä kuin ikivihreät havupuut. Vaikka fotosynteesi ja konduktanssi vähenivät merkittävästi, savulla ei ollut merkittävää vaikutusta kasvuun tai sekundaaristen puolustusyhdisteiden tuotantoon yhdessäkään tutkitussa puulajissa.
1. Johdanto
tuli on muovannut maanpäällisiä kasviyhteisöjä viimeiset 350 miljoonaa vuotta . Intermountain Westissä palolla on ollut keskeinen rooli kasviyhteisöjen jäsentämisessä tyypillisillä paluuväleillä 35-200 vuoden välillä . Tulipaloista syntyvä savu vaihtelee polttoainekuormituksen, voimakkuuden ja palamisen keston mukaan, ja se voi säilyä ilmassa viikkoja . Kasvien savuvaikutusten parempi ymmärtäminen on yhä tärkeämpää, kun pitempien kasvukausien ja kuivuuden tiheyden ja keston ennustetaan lisääntyvän tulevissa ilmastoskenaarioissa.
lähes kaikki tutkimukset, joissa selvitettiin savun vaikutuksia kasvien fysiologiaan ja kehitykseen, ovat liittyneet siementen itämiseen . Suhteellisen vähän tiedetään siitä, miten savu vaikuttaa kasvien primaariseen ja sekundaariseen aineenvaihduntaan. Davies ja Unam tutkivat Indonesian metsäpalojen vaikutuksia fotosynteesiin ja havaitsivat, että palojen aiheuttamasta hiilidioksidin lisääntymisestä huolimatta fotosynteettiset määrät laskivat. Gilbert ja Ripley osoittivat, että savualtistus vähensi ilmanlaadun konduktanssia, CO2-assimilaationopeutta ja solujenvälisten lehtien CO2-pitoisuuksia.
teoriassa savu voisi vähentää fotosynteesiä fysikaalisilla ja/tai kemiallisilla prosesseilla. Fyysisesti savun tuotanto voi johtaa korkeaan höyrynpainevajaukseen, joka voi laukaista ilmalukon sulkeutumisen . Kemiallisesti savusta on tunnistettu yli 100 yhdistettä . Niistä, jotka on tunnistettu, monilla tiedetään olevan fysiologisia vaikutuksia kasveihin , mukaan lukien NO2, CO2, SO2 ja O3 . O3 on yhdistetty klorofyllin tuhoutumiseen ja sen on myös osoitettu estävän suojasolun toimintaa sääteleviä k+ – kanavia ja puolestaan säätelevän ilmarakojen avautumista . SO2 vähentää konduktanssia, estää fotosynteettistä hapen evoluutiota ja elektroninsiirtoa sekä inaktivoi Calvin-syklin entsyymejä . Yhdistettyinä NO2-ja SO2-seosten on osoitettu estävän fotosynteesiä additivisesti . Pitkäaikaiset altistukset NO2: lle ja SO2: lle osoittavat , että Superoksididismutaasi ja glutationireduktaasi, jotka ovat kasvien tärkeimpiä antioksidanttientsyymejä, vähenevät myöhemmin . Antioksidanttisen entsyymin toiminnan lamaantuminen yhdessä korkean otsonipitoisuuden, voimakkaan hapettumista edistävän aineen, kanssa voi edistää oksidatiivista stressiä jatketun savualtistuksen aikana.
tulipalon aiheuttamat ympäristöolosuhteiden muutokset voivat vähentää kasvien kokemaa bioottista stressipainetta. Moritz ja Odion löysivät vahvan yhteyden Phytophthora ramorum-infektion puuttumisen ja viime palovamman jälkeisen ajan välillä. He ehdottivat, että tuli voi estää taudinaiheuttajien toimintaa lisäämällä Ca: n saatavuutta, mikä on ratkaisevan tärkeää kasvien vastustuskyvyn kannalta . Kuivempi mikroilmasto tulipalon jälkeen voi rajoittaa sienipatogeenien kasvua, ja Schwartz et al. ehdotti, että savun fungisidiset ominaisuudet vähentävät sieni-infektiota ja lehtien kasvua .
savu on erittäin monimutkainen kemiallinen cocktail, jossa on kasvien aktiivisia yhdisteitä, jotka voivat antaa tietoa kasveille ekosysteemeissä, jotka ovat äskettäin kokeneet tulipalon. Esimerkiksi joidenkin paloon sopeutuneiden kasvilajien siemenet käyttävät savua merkkinä siitä, että olosuhteet ovat suotuisat esimerkiksi itävyydelle . Butenolidi-3-metyyli-2H-furopyran-2-oni on savussa esiintyvä yhdiste, joka indusoi itävyyttä . Ei tiedetä, miten siemen havaitsee butenolidin, mutta on todisteita siitä, että se käynnistää itämisen helpottamalla veden saantia . Koska ympäristöoloissa tapahtuu paljon muutoksia tulipalon jälkeen (esim., kilpailun väheneminen, maaperän ravinnepulssit ja taudinaiheuttajakuormituksen väheneminen), kasvit voivat käyttää savua ympäristön merkkinä muiden adaptiivisten aineenvaihdunta-ja kasvuvasteiden aloittamiseksi.
tiivistyneet tanniinit ja fenoliglykosidit ovat lehtien puolustusyhdisteitä, joita kasvit tuottavat usein hyvin suurina pitoisuuksina (joillakin lajeilla jopa 30% kuivapainosta) puolustautuakseen kasvinsyöjiä ja taudinaiheuttajia vastaan . Resurssien kohdentaminen puolustuskemian tuotantoon johtaa kaupankäyntiin, jossa kasvupotentiaali vähenee . Plastisuus puolustuskemian tuotannossa vastauksena ympäristöolosuhteiden muutoksiin on osoitettu . Tulipalon jälkeisessä skenaariossa patogeenien ja hyönteisten paineen väheneminen voi johtaa siihen, että sekundaaristen puolustusyhdisteiden korkean tason tarve vähenee ja siten mahdollistaa suuremman resurssien kohdentamisen kasvuun ja lisääntymiseen.
tässä tutkitaan kolmen lehtikuusen (Populus tremuloides, Acer glabrum, Quercus gambelii) ja kolmen ikivihreän havupuulajin (Pinus ponderosa, Pseudotsuga menziesii ja Picea pungens) reaktioita lyhytaikaiseen savualtistukseen. Oletamme, että 1) savulle altistuminen vähentää fotosynteesiä ja ilmajohtavuutta; 2) savu toimii signaalina, joka johtaa taimivarojen jakamiseen pois puolustuskemian tuotannosta kasvuun.
2. Hoitoyksiköinä käytettiin materiaaleja ja menetelmiä
kuutta puulajia (Populus tremuloides, Acer glabrum, Quercus gambelii, Pinus ponderosa, Pseudotsuga menziesii ja Picea pungens) niiden toisena kasvuvuotena. Nämä lajit valittiin, koska niillä on sopeutumia, joiden avulla ne selviävät tulipalosta vastarinnan tai uusiutumisen avulla, mikä osoittaa niiden kehittyneen reagoidessaan tuleen. Populus tremuloides (vapiseva haapa), Acer glabrum (Kalliovuorivaahtera) ja Quercus gambelii (uhkapelitammi) reagoivat tuleen palamalla juurimukuloiden läpi . Ikivihreät havupuulajit kuten Pinus ponderosa (Ponderosa mänty) ja Pseudotsuga menziesii (douglaskuusi) käyttävät paksulla kuorellaan palonkestävyyttä . Picea pungens (sinikuusi) ei ole tunnettu palonkestävyydestä, mutta se on hyödyllinen toisena ikivihreänä havupuulajina, joka kokee säännöllisesti tulta. Kaikki nämä lajit ovat yleisiä Kalliovuorilla ja ovat ekologisesti tärkeitä lajeja. Populus tremuloides kasvatettiin tavallisen kloonin luonnonvaraisista juuripistokkaista, ja loput viisi lajia saatiin kahdelta taimitarhalta (Aurinkovuorten viljelijät Kaysvillessä Utahissa ja kasvit luonnon Tekoa Washingtonissa) ruukkukasvina ja paljaina juuristotaimina.
ennen istutusta pestiin taimien juuret ja mitattiin tuorepainoinen kasvimassa. Tutkimuksessa käytettiin kunkin lajin sisällä tasamassaisia ja-korkuisia puita. 26. -27. maaliskuuta 2008 kukin puu istutettiin turpeeseen / perliittiin (3 : 1) – pohjainen keskipitkän 75% -80% Kanadan Sphagnum turve sammal kipsi, perliitti, kalkkikivi ja kostutusaine (Sunshine Mix #1, Sun Gro Horticulture, Bellevue, WA) ruukuissa 23.5 cm 11.5 cm2. Jokaiseen ruukkuun lisättiin neljä grammaa Osmocote Smart Release-Kasviruokaa, jossa oli 14-14-14, jotta saatiin tarvittavat ravintoaineet kasvuun. Puut olivat loppukesän ilmastokontrolloidussa kasvihuoneessa ja niitä kasteltiin kylläisiksi kaksi kertaa viikossa.
2.1. Savun käsittely
26. -30. toukokuuta 2008 alkaen viisi eri lajeista tuotettua toisintoa altistettiin savulle porrastetusti (yksi toistettu joka päivä viiden päivän aikana). Savualtistus kesti 20 minuuttia. Toinen savualtistuksen jakso samoilla laitoksilla tapahtui 9. -13. kesäkuuta 2008.
savukammio oli valmistettu umpinaisesta muovijäähdyttimestä (95 cm 38 cm 45 cm). Savun syntyyn käytettiin yhtä suuri osa tutkimuksen kuudesta puulajista saatua kuivattua lehtiainesta. Lehdet poltettiin lasipulloon asennetussa lasisuppilossa, joka oli yhdistetty lasipullon yläosaan. Pullo jäähdytettiin jääkylvyssä, jotta lämpötila ei nousisi kammion sisällä. 25 sekunnin ajan 500 mg lehtiaineseosta poltettiin tuhkaksi butaanisytyttimellä ja savu vedettiin muoviletkun läpi kammioon kylmälaukun pohjalla olevaan letkuun kytketyn tyhjiön avulla. Jäähdyttimen sisällä oleva tuuletin levitti savua ja jäähdyttimen sisällä oleva floorinen valo antoi alhaisen valotason. Lämpötila savukammion sisällä ei koskaan ylittänyt , mitattuna Hobo U10-003-dataloggerilla (Onset Computer Corporation, Pocasset, MA). Kontrollikäsittelyissä käytettiin toista kammiota, joka oli samanlainen kuin ensimmäinen. Kaikki menetelmät olivat täsmälleen samat kontrollikammion osalta lukuun ottamatta sitä, että lehtiainesta ei laitettu lasisuppiloon.
savualtistustamme on vaikea verrata siihen, mitä luonnossa koetaan, sillä savuntuotanto on erittäin vaihtelevaa läntisessä Pohjois-Amerikassa . Tämä johtuu osittain polttoainekuorman, polttoaineen kulutuksen, päästönopeuden ja hajontanopeuden vaihteluista . Sekalaiset havumetsän polttoainekuormat voivat vaihdella 63-112 MT ja haapametsät 20-83 MT . Koska käytimme 0,03 MT: tä (savukammion lehtimassapinta-ala), arvioimme, että savualtistuksemme on vähäisempää kuin mitä metsäpalossa koetaan.
2.2. Kaasunvaihto
savualtistuksen jälkeen käsitellyt kasvit poistettiin savukammiosta fotosynteesin ja ilmajohtavuuden mittaamiseksi kaasunvaihtojärjestelmällä (LI-COR 6400, Li-Cor Biosciences, Lincoln, NE). Fotosynteettiset mittaukset tehtiin fotosynteettisellä fotonivuon tiheydellä (ppfd) 1200 mol m−2 s−1 6400-04 LED sinipunaisella valonlähteellä ympäristön lämpötilassa ja kosteudessa. Tehtiin kaksi mittausta, joissa CO2-pitoisuudet olivat 385 ppm ja 1000 ppm, ja CO2-pitoisuudet saavutettiin käyttämällä CO2-sekoitinta sen määrittämiseksi, liittyivätkö savun vaikutukset fotosynteesiin ilmatilaan ja/tai biokemiallisiin rajoituksiin . Mittaukset aloitettiin sulkemalla kammiossa oleva lehti jokaisen puun nuorimman täysin laajentuneen lehden tai neulasten päälle. Kun CO2-ja vesihöyrypitoisuudet lehtikammiossa olivat saavuttaneet vakaan tilan (60-90 sekuntia), fotosynteesin ja ilmanlaadun konduktanssin nopeus kirjattiin. Mittaukset tehtiin heti savualtistuksen jälkeen, 30 minuuttia altistuksen jälkeen ja sen jälkeen 70 minuutin välein, kunnes 310 minuuttia sen jälkeen.
niiden lehtien pinta-alan laskemiseksi, jotka eivät täyttäneet lehtikammiota, lehdet jäljitettiin paperille, joka leikattiin pois ja sitten mitattiin pinta-ala lehtien pinta-alamittarilla (Li-Cor 3000, Li-Cor Biosciences, Lincoln, NE, USA). Neulojen pinta-ala laskettiin skannaamalla kuva neuloista ja mittaamalla alue Scion-kuvalla ikkunoille (Frederick, Maryland, USA).
2.3. Kasvu
heinäkuun 29.päivänä 2008 puut korjattiin kasvu-ja massamittauksia varten. Varren korkeus mitattiin, minkä jälkeen taimi katkaistiin maan pinnalta ja sekä juuria että versoja kuivatettiin 72 tunnin ajan kuivan massan saamiseksi analyyttisen vaa ’ an avulla (GeneMate GP-600, ISC Bioexpress, Kaysville, UT, USA).
2.4. Sekundaarikemia
lehdet ja neulaset poistettiin taimista yhdeksän viikkoa savualtistuksen jälkeen (29.heinäkuuta 2008) ja pakattiin kuivajäälle ennen kuin ne siirrettiin varastoon fenoliglykosidien ja tiivistyneiden tanniinien myöhempää analysointia varten. Lehdet pakastekuivattiin ja neulaset uunikuivattiin 72 tunnin ajan. Lehti-ja neulamateriaali murskattiin sitten Wiley Millissä käyttäen No. 10-näyttöä. Tanniinit määritettiin kaikkien lajien osalta muunnetulla butanoli-HCL-menetelmällä, joka on kuvattu teoksessa Porter et al. , jossa noin 50 mg lehtiainesta laitettiin 2 mL: n kierrekorkkisiin mikrosentrifugiputkiin suspendoituna 1 mL: aan 70-prosenttista asetoni-10 mM askorbiinihappoliuosta. Sitten näytteitä pyörrettiin korkealla 20 minuutin ajan. Tämän jälkeen nestemäinen supernatantti poistettiin ja uutto toistettiin. Tämän jälkeen tanniinien pitoisuus kvantifioitiin spektrofotometrisesti (SpectraMax Plus 384, MDS, Toronto, Kanada) käyttäen standardina puhdistettuja tanniineja.
fenoliglykosidit, salisortiini ja tremulasiini, uutettiin noin 50 mg: sta haapalehden kudosta (muut lajit eivät sisällä merkittäviä määriä fenoliglykosideja). Kudosnäytteet laitettiin 2 mL: n kierrekorkkisiin mikrosentrifugiputkiin ja suspendoitiin metanoliin. Tämän jälkeen näytteitä pyörrettiin korkealla 5 minuutin ajan. Nestemäinen supernatantti poistettiin ja uutto toistettiin. Salikortiinin ja tremulasiinin lopulliset pitoisuudet määritettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografialla (Agilent 1100 Series, Santa Clara, CA, USA), jossa oli LunA 2, C18-kolonni (150 4, 6 mm, 5 m) virtausnopeudella 1 mL/min. Yhdistepiikit havaittiin käyttämällä UV-lamppua 280 nm: n aallonpituudella puhdistetulla salisortiini-ja tremulasiinistandardilla eristettynä haapojen lehdistä .
2.5. Tilastoanalyysi
suoritimme Ylioppilastestin, jossa testattiin eroja puolustuskemiassa ja kasvussa. Toistuvien mittausten analyysiä varianssista (ANOVA) käytettiin testaamaan savualtistuksen vaikutusta fotosynteesin nopeuteen 30 minuutin kuluttua altistuksesta 310 minuutin kuluttua altistuksesta käyttäen aikaa ”sisällä” – tekijänä . Varianssin homogeenisuutta ja normaaliutta testattiin Shapiro-Wilk w-tilastoilla ja yhtäläisillä varianssitesteillä. Tiedot, jotka eivät vastanneet parametristen testien oletuksia, testattiin Wilcox rank sum-testillä, kun taas graafien ja taulukoiden tiedot olivat muuntamattomia. Tilastoanalyysi tehtiin JMP: n version 7 tilastoohjelmistolla (SAS Institute, Cary, NC, USA).
3. Tulokset
kaikilla lajeilla havaittiin merkittäviä eroja ilmanlaadun konduktanssissa ja fotosynteesin nopeudessa 30 minuuttia altistuksen jälkeen, lukuun ottamatta Douglaskuusia. Haapamännyssä ja ponderosamännyssä fotosynteesi väheni eniten (Kuva 1). Douglaskuuset vähenivät aluksi merkittävästi ja (tietoja ei näy). Kahden viikon kuluttua altistuksesta fotosynteesinopeus mitattiin uudelleen, ja toipuminen oli täydellistä kaikilla lajeilla (tietoja ei näy).
(a)
(b)
(a)
(b)
(fotosynteesin maksiminopeus) ja (ilmatiivis konduktanssi) 30 minuutin savualtistuksen jälkeen. Douglaskuusi oli ainoa laji, jolla ei ollut merkittäviä eroja hoitojen välillä (tasolla).
toistuvien mittausten analyysi fotosynteesin nopeudesta (1000 ppm, CO2) osoitti merkittävän aikavaikutuksen (- arvon), jossa fotosynteesin nopeus palautui savualtistuksesta ajan edetessä (kuva 2). 1000 ppm: n kohdalla oli myös merkittävä vuorovaikutus ajan ja lajityypin (lehtimäiset koppisiemeniset ja ikivihreät havupuut) välillä (-arvo = .0073) lehtimetsäkasveilla, joiden toipuminen on hitaampaa (kuva 2). 385 ppm CO2: lla aika oli ainoa merkittävä vaikutus toistuvien mittausten mallissa (- arvo =.0209). Lajityyppi oli marginaalisesti merkittävä (- arvo = .0709).
(a)
(b)
(a)
(b)
fotosynteesin väheneminen ilmaistuna prosenttierona kontrollista sekä ympäristön (a) (385 ppm) että kyllästyvän (b) (1000 ppm) CO2-pitoisuuksissa.
kasvun, tiivistyneiden tanniinien tai fenoliglykosidien osalta ei havaittu merkittäviä eroja (kuva 3; viimeksi mainitun osalta tietoja ei ole esitetty).
(a)
(b)
(a)
(b)
biomassan ja tiivistyneiden tanniinien Vertailu savulle altistuneissa näytteissä ja kontrolleissa. Minkään lajin hoitojen välillä ei ollut merkittäviä eroja.
4. Keskustelu
tiedot ovat yhtäpitäviä ensimmäisen hypoteesimme kanssa, jonka mukaan savualtistus vähentää fotosynteesin nopeutta. Fotosynteettisten vasteiden vertailu ympäristön ja kyllästyvän hiilidioksidin pitoisuuksissa viittaa siihen, että savu vaikuttaa fotosynteettiseen toimintaan vähentämällä ilmanlaadun konduktanssia ja heikentämällä biokemiallista toimintaa (kuva 2). Tuloksemme osoittavat ensimmäistä kertaa, että fotosynteettinen herkkyys savulle esiintyy eri puulajeissa ja että herkkyys vaihtelee suuresti eri lajien välillä.
savun ainesosien monimutkaisuuden vuoksi on vaikea määrittää, mitkä kemikaalit saattavat vaikuttaa haitallisesti fotosynteesiin. Erilaiset savun yhdisteet, kuten NO ja NO2, vaikuttavat kasvilajeihin vaihtelevasti . Havaitsimme, että ikivihreät havupuut toipuivat aluksi savualtistuksesta nopeammin kuin lehtikuusikasvit (kuva 2). Puolen tunnin kuluttua savuhoitojen päättymisestä vain douglaskuusi oli toipunut täysin (fotosynteesin alkunopeutta ei näy) (Kuva 1). Vaikka ikivihreät havupuut toipuivat nopeammin kuin lehtikuusikot, kasvutavoissa tai puolustuskemian tuotannossa ei tapahtunut muutoksia savualtistuksen seurauksena (kuva 3). Tämä osoittaa, että suhteellisen lyhyestä 20 minuutin savualtistuksesta ei ollut pitkäaikaisia vaikutuksia.
ei tiedetä, miksi ikivihreät havupuut toipuivat aluksi nopeammin kuin lehtikuusikot. Kasvilajit voivat kehittää sietokykyä epäpuhtauksille, joiden tiedetään vaikuttavan fotosynteesiin . Ikivihreiden havupuiden suurempi sietokyky voi johtua erilaisista palostrategioista, joissa tammella, kalliovuorivaahteralla ja haapalla on ylimoraalisen moraalin mukainen selviytymisstrategia, jota seuraa suvuton Uudestisyntyminen joskus myöhemmin . Sen sijaan ikivihreät havupuulajit, kuten ponderosamänty ja douglaskuusi, käyttävät paksulla kaarnallaan palonkestävyysstrategiaa, joka mahdollistaa ylimystön selviytymisen . Oletamme, että lajeilla, jotka käyttävät palonkestävyysstrategiaa, olisi suurempi tarve kehittää sietomekanismeja, jotta vältetään neulojen altistuminen savulle pitkiksi ajoiksi.
tulokset ovat ristiriidassa toisen hypoteesin kanssa, jonka mukaan savu muuttaa kasvutapoja tai allokointia puolustuskemiaan. On todennäköistä, että kaksi 20 minuutin savualtistusta eivät riitä antamaan kasvuvastetta. Länsi – Pohjois-Amerikassa, kasvit voivat altistua savulle asteikolla viikoista kuukausiin, tarkistettuna . Näin pitkä savualtistus on kontrolloiduissa tutkimuksissa epäkäytännöllistä, mutta puiden vuosirenkaita koskevia tietoja voitaisiin mahdollisesti käyttää tutkittaessa kasvunopeuden ja savun määrän korrelaatioita kesäkaudella, jos voidaan ottaa huomioon muita sekoittavia tekijöitä.
on muutamia mahdollisia syitä, miksi puolustuskemiassa ei havaittu merkittäviä eroja savuhoitojen vasteessa. Ensinnäkin haapojen kohdalla tiedetään, että eri genotyypit reagoivat eri tavoin ympäristön muutoksiin . Tässä käytimme vain yhtä genotyyppiä ja se voi johtaa puuttuviin vasteisiin, joita esiintyy muissa haapojen genotyypeissä. Toiseksi, toisin kuin siementen itämisessä, kasvit eivät saa käyttää savua merkkinä fysiologisista lehtireaktioista tulipalon jälkeen. Kolmanneksi, kun tarkastelimme kahta tärkeää puolustusyhdistettä määrän ja toiminnan perusteella, emme todellakaan tehneet kattavaa tutkimusta sekundaarisista metabolisista vasteista. Lopuksi on myös mahdollista, että savualtistustemme jälki (kemia, ajoitus, voimakkuus) ei ollut riittävä puolustusreaktion aikaansaamiseksi.
koska savussa on monia yhdisteitä ja tiedämme niin vähän siitä, miten ne voivat vaikuttaa kasveihin, meillä on paljon opittavaa savun vaikutuksesta kasvien toimintaan. Se, että eri kasvilajit voivat reagoida savuun vaihtelevasti, sen lisäksi, että eri kasvilajit voivat tuottaa omia monimutkaisia yhdisteitään, viittaa siihen, että savulla voi olla joitakin kiehtovia rooleja kasvien ja ekosysteemien toiminnassa.
kiitokset
kiitokset annetaan Joey Schmutzille taimien istutuksesta ja valvonnasta, Eric Smithille savualtistuksesta ja näytteiden käsittelystä sekä Mitchell Calderille avusta sadonkorjuussa.
